研究人员提出了一种对尿液进行全面蛋白质组分析的简便策略

尿液是早期和敏感生物标志物发现的有吸引力的来源之一，因为它可以在非侵入性收集的同时积累并反映人体的变化。然而，尿液蛋白质组的分析由于其宽动态范围而面临挑战，蛋白质浓度跨越约10个数量级。

尿液中高丰度蛋白质的存在会掩盖潜在的疾病生物标志物，使其难以识别。在进行质谱(MS)分析之前，通常采用分级分离和去除策略，以增强对这些难以捉摸的生物标志物的检测和鉴定。

作为一种有前途的替代方案，通过超速离心(UC)进行尿液分离可用于去除高丰度蛋白质，从而可以分离高纯度的外泌体，同时保留上清液中的大部分高丰度蛋白质。尽管如此，UC过程中强大的离心剪切力不可避免地会破坏外泌体的完整结构，导致仅从少量尿液中分离出微量。

考虑到所有现有的局限性，中国的一组研究人员提出了一种基于固相烷基化(SPA)的新型样品制备方法，用于亚微克蛋白质组学样品的低损耗、抗干扰处理。该团队在《尿液》杂志上报告了他们的研究。

“我们的方法结合了UC分级分离，固相萃取(SPA)样品制备和液相色谱 -质谱(LC-MS)，以实现尿液的全面蛋白质组分析，称为CPU，或尿液的综合蛋白质组分析，”通讯作者，中国科学院大连化学物理研究所教授Huiming Yuan解释说。“这种简单的策略导致使用大约一小时的短LC梯度鉴定了总共1，659种蛋白质，这是未经分离从生尿中鉴定的2种蛋白质的3.730倍。

值得注意的是，与现有的尿液样本制备方法相比，CPU具有显着的优势。它不仅将分析时间大幅缩短了 3-4 倍，而且还将尿液蛋白质组的识别覆盖率提高了 130%-160%。

“该方法进一步与无标记定量相结合，对来自IgA肾病(IgAN)患者和健康供体的尿液进行比较蛋白质组分析，”主要作者，中国科学院大连化学物理研究所技术员刘欣欣说。“结果，鉴定出227种差异表达的蛋白质，揭示了与IgAN相关的潜在生物标志物。

发现溶质载体家族22(SLC22)的几个成员在IgAN患者中上调，这表明与这些个体的肾代谢功能破坏有关。

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